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          犬黑熱病(L.donovani)ELISA試劑盒使用說明書

          更新時間:2023-07-11   點擊次數:309次

          黑熱病(L.donovani)ELISA試劑盒使用說明書

          本試劑盒僅供研究使用。

                                                                             96T

           

          使用目的:

          本試劑盒用于測定犬血清,血漿及相關液體樣本中黑熱病(L.donovani)表達。

          實驗原理

          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本犬黑熱病(L.donovani)表達。用純化的犬黑熱病(L.donovani)抗體包被微孔板,制成固相抗,可與樣品中黑熱病(L.donovani)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的黑熱病(L.donovani)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中犬黑熱病(L.donovani)的存在與否。

          試劑盒組成

          1

          30倍濃縮洗滌液

          20ml×1

          7

          終止液

          6ml×1

          2

          酶標試劑

          6ml×1

          8

          陽性對照

          0.5ml×1

          3

          標包被

          12孔×8

          9

          陰性對照

          0.5ml×1

          4

          樣品稀釋液

          6ml×1

          10

          說明書

          1

          5

          顯色劑A

          6ml×1

          11

          封板膜

          2 

          6

          顯色劑B

          6ml×1/

          12

          密封袋

          1

          標本要求 

          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

          操作步驟

          1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)

          2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,

          3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

          4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

          5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

          6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

          7. 溫育:操作同3。

          8. 洗滌:操作同5。

          9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

          10. 終止:每孔加終止50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

          11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

           

          計算和結果判定:

            試驗有效性:陽性對照孔平均值1.00; 陰性對照平均值0.20

            臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

            陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為黑熱病(L.donovani)陰性

            陽性判定:樣品OD 臨界值(CUT OFF)者為黑熱病(L.donovani)陽性。

          注意事項

          1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

          2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

          3濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

          4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

          5.底物請避光保存。

          6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

          7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。

          保存條件及有效期

          1試劑盒保存:;2-8。

          2.有效期:6個月

           





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